熒光蛋白知識常見問題解答

熒光蛋白知識常見問題解答

1.什么是綠色熒光蛋白?
(green fluorescent protein),簡稱GFP,這種蛋白質*早是由下村脩等人在1962年在一種學名Aequorea victoria的水母中發現.其基因所產生的蛋白質,在藍色波長范圍的光線激發下,會發出綠色螢光.這個發光的過程中還需要冷光蛋白質Aequorin的幫助,且這個冷光蛋白質與鈣離子(Ca2+)可產生交互作用.由水母Aequorea victoria中發現的野生型綠色螢光蛋白,395nm和475nm分別是*大和次大的激發波長,它的發射波長的峰點是在509nm,在可見光綠光的范圍下是較弱的位置.由海腎(sea pansy)所得的綠色螢光蛋白,僅有在498nm有一個較高的激發峰點.在細胞生物學與分子生物學領域中,綠色螢光蛋白基因常被用作為一個報導基因(reporter gene).一些經修飾過的型式可作為生物探針,綠色螢光蛋白基因也可以克隆到脊椎動物(例如:兔子上進行表現,并拿來映證某種假設的實驗方法.

2.綠色熒光蛋白發光原理是什么？
綠色熒光蛋白并不需要與其他物質合作,只需要用藍光照射,就能自己發光

3.綠色熒光蛋白標記技術有什么意義?
在生物學研究中,科學家們常常利用這種能自己發光的熒光分子來作為生物體的標記.將這種熒光分子通過化學方法掛在其他不可見的分子上,原來不可見的部分就變得可見了.生物學家一直利用這種標記方法,把原本透明的細胞或細胞器從黑暗的顯微鏡視場中“揪出來”.傳統的熒光分子在發光的同時,會產生具有毒性的氧自由基,導致被觀察的細胞死亡,這叫做“光毒性”,因此,在綠色熒光蛋白發現以前,科學家們只能通過熒光標記來研究死亡細胞靜態結構,而綠色熒光蛋白的光毒性非常弱,非常適合用于標記活細胞.

運用熒光蛋白可以觀測到細胞的活動,可以標記表達蛋白,可以進行深入的蛋白質組學實驗等等.特別是在癌癥研究的過程中,由于熒光蛋白的出現使得科學家們能夠觀測到腫瘤細胞的具體活動,比如腫瘤細胞的成長、入侵、轉移和新生.

4.紅色熒光蛋白一般用什么緩沖液溶解？
紅色熒光蛋白用什么緩沖液溶解，一般取決于生產廠家的說明書保存制劑，或者使用時特殊的試劑要求。正常來講紅色熒光蛋白生產后的保存試劑都是PBS（磷酸鹽緩沖液），所以使用時一般用PBS來溶解。但是如果使用時有什么特別的要求，也可以使用特殊的緩沖液溶解。但是一般紅色熒光蛋白用都是用磷酸鹽緩沖液來溶解的。

5.什么是紅色螢光蛋白RFP？
紅色熒光蛋白(Red Fluorecent Protein,RFP)基因是從海葵Discoso-masp中分離出的一種新的熒光蛋白基因，其蛋白質的*大吸收光譜為583 nm，不需要任何預處理便可檢測到[。紅色熒光蛋白因其紅熒光較強的組織穿透力，已被廣泛用于動物、植物和酵母等真核細胞內基因表達的報告基因。

6.紅色熒光蛋白RFP的螢光波長和激發波長？

熒光蛋白激發光源的主要產品應用：
檢測轉綠色熒光蛋白（GFP）基因、紅色熒光蛋白（DsRed）基因植物：水稻、小麥、玉米、大豆、棉花、擬南芥
檢測轉GFP、DsRed基因動物：小鼠、兔子、猴子等；
檢測轉GFP、DsRed基因微生物：細菌、**、酵母等；
檢測GFP、DsRed基因組織特異性表達；

常用熒光蛋白的激發光源的選型LUYOR-3415RG